原理
ローリー法（Lowry Method）はBiuret法をさらに発展させた比色法であり、タンパク質濃度定量に用いられる。
アルカリ性条件でCu2+をタンパク質に加えることで還元体のCu+が生成するが、これがFolin-Ciocalteu試薬中のタリンモリブデン酸-タングステン錯体を還元し、青く発色する。これを770 nmの吸光度を測定することによって定量する。
長所
- 測定範囲は0.2-2 mg/mL、Biuret法より改善している
- 操作が簡便
短所
- 反応に時間がかかる。
- 界面活性剤、キレート剤、チオール還元剤などで妨害をうける
プロトコル
Lowry試薬の調製法
A液
Na2CO3（20 g）、NaOH（4 g）をMQ水に溶解し全量1 Lとする。室温～冷蔵下にで、数ヶ月保存可能
B液
Cu2SO4-5H2O（1 g）、酒石酸ナトリウムカリウム（2 g）をMQ水に溶解し、全量200 mLとする。室温～冷蔵下にで、数ヶ月保存可能
Folin-Ciocalteu フェノール試薬
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プロトコル
- 50容量のA液と、1容量のB液を混合する（用時調製）
- サンプル（100 μL）に対し、1.の混合液を1mL加え、ボルテックス攪拌する
- 30℃で10分静置する
- Folin試薬を100μL加え、ボルテックス攪拌する
- 30℃で30分静置する
- 770 nmの吸光度を測定する。
- BSAを標準試料として希釈系列と検量線を作成し、それをもとに濃度を定量する。
関連動画
参考文献
- ”総タンパク質の定量法” 鈴木祥夫、ぶんせき 2018, 1, 2. [PDF]
- “[6] Quantification of protein” Stoscheck, C. M. Met. Enzymol. 1990, 182, 50. doi:10.1016/0076-6879(90)82008-P
- “Protein Measurement with the Folin Phenol Reagent” Lowry, O. H.; Rosebrough, N. J.; Farr, A. l.; Randall, R. J. J. Biol. Chem. 1951, 193, 265-275. doi:10.1016/S0021-9258(19)52451-6
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外部リンク
- ”総”タンパク質定量法の種類をまとめてみた（Thermo Fisher）
- タンパク質を定量したい（同仁化学、PDF）
- 分光光度計を利用したタンパク質の定量（Cytiva）
- タンパク質の定量法（生命医学をハックする）
- タンパク質の定量
- ローリー法 – Wikipedia
- Lowry Protein Assay – Wikipedia
- フォリン・チオカルトー試薬 – Wikipedia
